概率是因为hsp60与人类hsp60同源性高,导致交叉反应……”许秋分析。
因而第三轮改良,许秋又针对免疫荧光染色做出改动,尝试定位活菌!
手法也很简单。
首先,是细菌固定与载片制备。
活嗜沫凝聚杆菌悬液用4%多聚甲醛固定15分钟,随后滴加10微升至聚赖氨酸包被的载玻片,室温干燥……
随后进行封闭与抗体孵育、封闭液,采取3%bsa-pbs封闭30分钟。
一抗,利用患者血清1:50稀释,湿盒内37摄氏度孵育1小时。
二抗则fitc标记抗人igg,避光孵育1小时……
最终,在激发波长488nm的荧光显微镜下,发现了微弱背景荧光!
而同一时间,放射性标记活菌追踪却让人绝望。
18f-fdg标记、sd大鼠经尾静脉注射18f-fdg标记菌悬液建立动物模型,最后pet-ct成像……
然而,不管是实验组还是对照组,都没有显示任何特异性放射性浓聚灶!
“各个组别,结果表现都比较一致,即便有反应,也是交叉反应……与嗜沫凝聚杆菌无关。”邱伟道。
说实话,此时他有点怀疑,嗜沫凝聚杆菌致病的研究方向是不是搞错了。
唯一有点用的,大概就是免疫荧光染色发现的微弱荧光了……迄今为止,都没法确定这种微弱荧光来自哪儿,究竟是致病菌的抗原抗体结合,还是说——又是一个误会?
而就在这时候,许秋却是放下了这些资料,他抬起头来,起身往外走去,道:“走吧,复现的办法我基本上已经猜到了,接下来结束这场实验。”
听到这话,邱伟霍然睁大眼睛,脸上尽是惊骇与狂喜!